Mae cromatograffaeth hylif perfformiad uchel yn bennaf yn cynnwys system chwistrellu, system trwyth, system wahanu, system ganfod, a system prosesu data. Bydd y canlynol yn cyflwyno eu cyfansoddiadau a'u nodweddion priodol.
1. Yn gyffredinol, mae'r system chwistrellu yn defnyddio chwistrellydd diaffram neu siambr chwistrellu pwysedd uchel i gwblhau'r llawdriniaeth chwistrellu, gyda chyfaint pigiad cyson. Mae hyn yn fuddiol ar gyfer gwella atgynhyrchu dadansoddiad sampl.
2. Mae'r system trwyth yn cynnwys tair rhan: pwmp pwysedd uchel, cronfa ddŵr cam symudol, a mesurydd graddiant. Pwysedd cyffredinol pwmp pwysedd uchel yw l. 47-4.4X107Pa, cyfradd llif addasadwy a sefydlog. Pan fydd cyfnod symudol pwysedd uchel yn mynd trwy'r golofn cromatograffig, gall leihau effaith trylediad y sampl y tu mewn i'r golofn, cyflymu'r cyflymder symud y tu mewn i'r golofn, gwella'r radd gwahanu, ac adennill y sampl. Yn fuddiol ar gyfer cynnal gweithgaredd biolegol y sampl. Gall gwall storio cyfnod symudol a dadansoddwr graddiant newid y cyfnod symudol yn ôl priodweddau'r cyfnod llonydd a'r sampl, gan gynnwys newid y polaredd, cryfder ïon, a gwerth pH yr eluent, neu ddefnyddio atalyddion cystadleuol neu asiantau dadnatureiddio. Mae hyn yn galluogi gwahanu sylweddau lluosog yn effeithiol, hyd yn oed os mai dim ond un set o wahaniaethau neu isomerau sydd.
3. Mae'r system wahanu yn cynnwys colofnau cromatograffaeth, tiwbiau cysylltu, thermostatau, ac ati. Mae hyd y golofn gromatograffig yn gyffredinol 10-50cm (os oes angen dau, gellir ychwanegu tiwb cysylltu rhyngddynt), gyda diamedr mewnol o 2-5mm, wedi'i wneud o ddur di-staen o ansawdd uchel neu diwb gwydr â waliau trwchus neu aloi titaniwm. Mae gwedd sefydlog gyda maint gronyn o 5-10 μ m (sy'n cynnwys matrics a gosodyn). Mae'r matrics yn y cyfnod llonydd wedi'i wneud o resin cryfder mecanyddol uchel neu gel silica, sydd â segurdod (fel gel silica alcalïaidd wedi'i dynnu), mandylledd (maint mandwll hyd at 1000?), ac arwynebedd arwyneb penodol mawr. Maent wedi'u gorchuddio'n fecanyddol ar gyfer cyplu (yn debyg i baratoi cyfnodau llonydd cromatograffaeth nwy), neu wedi'u cyplysu'n gemegol â genynnau amrywiol (fel ffosffad, amino cwaternaidd, hydroxymethyl, ffenyl, amino, neu hydoedd amrywiol o alcyl cadwyn garbon) neu ligand cyfansoddion organig . Felly, mae gan y strwythur cymharol sefydlog hwn ddetholusrwydd da. Er enghraifft, ar ôl cyplu agglutinin pys (PSA) ar wyneb gel silica mandyllog, gellir ynysu glycoproteinau mewn ffibroblastau. Yn ogystal, mae'r plasmid sy'n seiliedig ar gyfnod llonydd yn fach ac mae gwely'r golofn yn hawdd i gyflawni cyflwr unffurf a thrwchus. Mae'n hawdd lleihau effaith trylediad cerrynt eddy. Mae maint y gronynnau matrics yn fach, mae'r micropores yn fas, ac mae trosglwyddiad màs y sampl yn yr ardal microporous yn fyr. Mae'r rhain yn fuddiol ar gyfer lleihau lled band a gwella datrysiad. Yn ôl dadansoddiad theori effaith y golofn, y lleiaf yw maint y gronynnau matrics a'r mwyaf yw rhif damcaniaethol N y plât. Mae hyn yn profi ymhellach po leiaf yw maint y gronynnau matrics, yr uchaf yw'r radd gwahanu. Yn ogystal, gall thermostatau cromatograffaeth hylif perfformiad uchel addasu'r tymheredd o dymheredd yr ystafell i 60 gradd, gan fyrhau'r amser dadansoddi trwy gynyddu'r gyfradd trosglwyddo màs., Gall wella effeithlonrwydd y golofn gromatograffig.
4. Mae'r synwyryddion a ddefnyddir yn gyffredin ar gyfer systemau canfod HPLC yn cynnwys synwyryddion uwchfioled, synwyryddion mynegai plygiannol, a synwyryddion fflworoleuedd.
(1) Mae'r synhwyrydd UV yn addas ar gyfer canfod samplau â nodweddion amsugno o dan olau uwchfioled (neu weladwy). Ei nodweddion: ystod eang o gymwysiadau (fel proteinau, asidau niwclëig, asidau amino, niwcleotidau, peptidau, hormonau, ac ati); Sensitifrwydd uchel (terfyn canfod o 10-10g/ml); Amrediad llinellol eang; Ddim yn sensitif i newidiadau tymheredd a chyfradd llif; Yn gallu canfod samplau wedi'u hoelio â datrysiadau graddiant.
(2) Gellir defnyddio synhwyrydd mynegrif plygiannol gwahaniaethol i ganfod yr holl gydrannau sampl gyda mynegeion plygiannol sy'n wahanol i'r rhai a ganfyddir gan synhwyrydd cyfnod symudol. Ar hyn o bryd, mae'r rhan fwyaf o gyfansoddion carbohydrad yn cael eu canfod gan ddefnyddio'r system ganfod hon. Mae gan y system gyffredinolrwydd cryf a gweithrediad syml, ond gall sensitifrwydd isel (terfyn canfod o 10-7g/ml), a newidiadau yn y cyfnod symudol achosi newidiadau yn y mynegai plygiannol. Felly, nid yw'n addas ar gyfer dadansoddi olion nac ar gyfer canfod samplau elution graddiant.
(3) Mae'r synhwyrydd fflworoleuedd ond yn addas ar gyfer pennu cyfansoddion organig fflwroleuol (fel hydrocarbonau aromatig polysyclig, asidau amino, aminau, fitaminau, a rhai proteinau) o dan amodau penodol, yn seiliedig ar ddwysedd fflworoleuedd a chrynodiad y golau a allyrrir. Mae ei sensitifrwydd yn uchel iawn (10-12~{10-14g/ml) yw'r terfyn canfod), a gellir ei ddefnyddio ar gyfer dadansoddi olion a chanfod mewn gwaith elution graddiant.
5. Gall y system prosesu data gasglu, storio, arddangos, argraffu, a phrosesu data prawf i wahanu samplau, a gallant berfformio gwaith paratoi neu adnabod yn gywir